午夜精品白在线观看-日本人妻伦在线中文字幕-国内精品久久毛片一区二区-欧美一性一交一伦一A片视频-cijilu在线视频-老师的丰满大乳奶-亚洲精品久久7777777-车上疯狂做爰HD韩国-丰满少妇猛烈进入A片高潮小说-青草视频在线观看视频-最好看最新高清中文字幕电影-最好看十大无码AV-新超碰97在线观人人澡,老女人刮伦内谢视频,成人国成人国产,国产又爽又黄A片,亚洲男人天堂一区二区三区,男人天堂网夜色99视频,亚洲无码专区色爱天堂,少妇高清性色生活片成人片,男男白白嫩嫩小受片小说,加勒比海盗,古装片,爆操无码,免费韩漫完整版漫画在线观看,姝姝下面好湿视频,一级黄色毛片视频,色情免费100部A片看片,久久久无码精品亚洲日韩啪啪网站,亚洲永久无码动漫在线观看 ,国产69精品久久熟女,婷婷综合缴情亚洲狠狠,国产一区日韩二区欧美三区,浴室里强摁做开腿呻吟的视频,亚洲精品久久久小说,污污内射在线观看一区二区少妇,日韩人妻无码精品久久三,欧美亚洲日本一区,男同桌上课时狂揉我下面污文,麻豆精品一区二区三区,老师洗澡让我吃她胸的视频,久久久久亚洲无码观看黑人,久久精品手机观看

二甲基亞砜是一種重要的滲透型細胞保護劑，在深低溫（零下200度）保存細胞時凍存過程中，為防止細胞內液冰晶形成、滲透壓改變、細胞結構紊亂等導致的損傷，有必要使用含有DMSO冷凍保護劑。

DMSO能夠快速穿透細胞膜進入細胞中，降低冰點、延緩凍存過程，同時提高細胞內離子濃度，減少細胞內冰晶的形成，從而減少細胞損傷。深低溫時二甲基亞砜的細胞毒性受到抑制，復蘇時動作要快，盡快洗掉二甲基亞砜，否則會造成對細胞嚴重的毒性。二甲基亞砜（DMSO）是好的細胞凍存保護劑，但也是一種以細胞毒性很大的化學試驗劑，研究結果表明，培養液中DMSO濃度為10%時，細胞生長抑制率近100%；1‰濃度時抑制率為35%，即使是0.04‰的濃度，DMSO對細胞的生長也有不利的影響。

細胞凍存

1、配制含10%DMSO或甘油、10～20%小牛血清的凍存培養液。2、取對數生長期的細胞，去除舊培養液，用PBS清洗。3、去除PBS，加入適量胰蛋白酶（覆蓋培養皿表面）把單層生長的細胞消化下來。4、離心1000rpm，5min。5、去除胰蛋白酶，加入適量配制好的凍存培養液，用吸管輕輕吹打使細胞均勻，計數，調節凍存液中細胞的密度為5×106/ml～1×107/ml。6、將細胞分裝入凍存管中，每管1～1.5 ml。7、在凍存管上標明細胞的名稱，凍存時間及操作者。8、凍存：標準的凍存程序為降溫速率-1～-2℃/ min；當溫度達-25℃以下時，可增至-5℃～-10℃/min；到-100℃時，則可迅速浸入液氮中。也可將裝有細胞的凍存管放入-20℃冰箱2h ，然后放入-70℃冰箱中過夜，取出凍存管，移入液氮容器內。

細胞復蘇

1、從液氮容器中取出凍存管，直接浸入37℃溫水中，并不時搖動令其盡快融化。2、從37℃水浴中取出凍存管，打開蓋子，用吸管吸出細胞懸液，加到離心管并滴加10倍以上培養液，混勻。3、離心，1000rpm，5min。4、棄去上清液，加入含10%小牛血清培養液重懸細胞，計數，調整細胞密度，接種培養瓶，37℃培養箱靜置培養。5、次日更換一次培養液，繼續培養。